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ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告
更新時間:2015-03-26   點(diǎn)擊次數(shù):983次

  應(yīng)客戶們對年前產(chǎn)品預(yù)購的要求,今日開始逐漸安排發(fā)貨,具體內(nèi)容公司業(yè)務(wù)員會及時。新年的開始中,公司技術(shù)專員為ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告做出一番整理,在這里分享給您,供參考。
◎ELISA方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法:檢測抗原(體)的常見方法,應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原,不能測 小分子半抗原)。
  2.間接法:檢測抗體的方法,利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體。
  3.競爭法:檢測抗原或小分子半抗原、抗體,以測抗原為例,使待測抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,結(jié)果如待測抗原含量越多,與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少,顯色越淺,二者呈負(fù)相關(guān)。
◎操作注意
  ① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  ② 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  ③ 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
◎ELISA試劑盒質(zhì)控分析
  1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括:①檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理(ELISA試劑盒原理);②熟悉檢測技巧,了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點(diǎn);熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成,包被片段及其組成);③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識;④某些特殊項(xiàng)目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班,考試合格后持證上崗。
  2.基本了解
    ① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
    ② 特點(diǎn):ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
    ③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì),進(jìn)行信號放大;
    ④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程;
    ⑤ 靈敏度特異性相對較高。
    ⑥ 局限性:只能檢測到ng水平
    ⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%);
    ⑧ ELISA檢測試劑盒線性范圍窄(一個數(shù)量級);
    ⑨ 存在"HD-HOOK"效應(yīng)。


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